当前位置： 体位性脑缺血 > 轻微脑缺血 > 动物用siRNA案例应用策略解析
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InvivosiRNA最关键的问题就是siRNA稳定性及给药策略，适当的化学修饰是解决siRNA稳定的重要方法之一。锐博生物研发的genOFFTMinvivosiRNA，采用特殊的化学修饰方式，大大提高了siRNA的血清稳定性，并保持了siRNA的高效活性；通过采用国际先进的处理方法，能够最大限度降低对实验动物的毒性。
InvivosiRNA给药方法大致分为系统给药（如静脉给药、腹腔给药等）和局部给药（如皮下注射，玻璃体给药，鞘内给药等）。siRNA系统给药每次注射5~20nmol/20g体重，局部给药则需每次注射1~5nmol/20g体重,给药频率往往是一周2~3次，也可根据实验方案灵活设定给药剂量和频次，探索更佳的实验条件。
首先需要根据动物模型和实验方案，确定给药量和给药次数，然后计算出实验所需的总用量。需要根据不同的器官来选择给药方法，而给药量因不同给药方法和实验目的而异。如肝脏、肾脏、肌肉等常用静脉注射（系统给药）；而皮下肿瘤则常用到瘤内注射（局部给药）。
局部给药（Localadministration）
适用范围：浅表器官和组织，包括眼、肺、脑、肌肉、皮下组织、叶鞘组织等。
特点：最直接最常用的导入方式，siRNA的导入效率较高，用量少，siRNA能很快被吸收。因此，genOFFTMinvivosiRNA在局部注射的应用中更有优势。
系统给药（Systemicadministration）
适用范围：siRNA具有广泛的组织分布，包括心、肝、肾、肺等。
特点：一些无法通过局部给药方式到达的靶位，如深入的内脏器官和一些散在分布的靶位（如淋巴细胞，转移性肿瘤细胞等），一般使用系统注射方式。
本期文章小编给大家带来了几篇关于invivosiRNA给药方式的客户应用案例，我们也将不定时地更新更多invivosiRNA在动物体内的应用策略，希望能够对正在或即将要做动物实验的各位小伙伴有一定的帮助！
应用案例1：
AdvancedScience(IF15.)丨AldehydeDehydrogenase2MediatesAlcohol-InducedColorectalCancerImmuneEscapethroughStabilizingPD-L1Expression
研究模型：结直肠癌（将悬浮在PBS中的结肠癌CT26细胞（3×）皮下注射到具有免疫活性的BALB/c小鼠（5-6周龄，雌性）或免疫功能不全的NSG小鼠（6周龄）右侧，以构建结直肠癌研究模型）
动物模型：荷瘤小鼠模型（当肿瘤达到≈50mm3时，将小鼠随机分为4组，分别为对照组、PD-1治疗组、si-ALDH2组和si-ALDH2+PD-1治疗组）
给药方式：瘤内注射
给药剂量：10nmol（siRNA溶于50??L生理盐水缓冲液中）
给药频率：每3天一次，持续注射4次
Fig1.瘤内注射si-ALDH2增强了CT26肿瘤模型中PD-1阻断的功效
参考文献：ZhangH,XiaY,WangF,etal.AldehydeDehydrogenase2MediatesAlcohol‐InducedColorectalCancerImmuneEscapethroughStabilizingPD‐L1Expression[J].AdvancedScience,:.
应用案例2：
SignalTransductionandTargetedTherapy(IF13.)丨UBQLN1mediatessorafenibresistancethroughregulatingmitochondrialbiogenesisandROShomeostasisbytargetingPGC1βinhepatocellularcarcinoma
研究模型：肝细胞癌（将HepG2或HCCLM3细胞通过皮下植入到4周龄BALB/c裸鼠体内，构建了两种皮下细胞衍生的HCC小鼠模型，所有小鼠在实验期间都接受30mg/kg/d的索拉非尼处理）
动物模型：荷瘤小鼠模型（当肿瘤直径达到~3mm时，将小鼠随机分为2组：UBQLN1下调组和对照组）
给药方式：瘤内注射
给药剂量：5nmol
给药频率：每周2次，注射2周
Fig2.瘤内注射si-UBQLN1使得HepG2和HCCLM3异种移植物对索拉非尼治疗重新敏感
参考文献：XuJ,JiL,RuanY,etal.UBQLN1mediatessorafenibresistancethroughregulatingmitochondrialbiogenesisandROShomeostasisbytargetingPGC1βinhepatocellularcarcinoma[J].SignalTransductionandTargetedTherapy,,6(1):1-13.
应用案例3：
MolecularCell（IF15.）丨LncRNACamK-ARegulatesCa2+-Signaling-MediatedTumorMicroenvironmentRemodeling
研究模型：乳腺癌（从三阴性乳腺癌患者中产生CamK-A高表达的PDX肿瘤，并立即将组织植入、扩大和皮下植入年龄匹配的无胸腺雌性裸鼠的乳腺脂肪垫中，以构建乳腺癌研究模型）
动物模型：荷瘤小鼠（随机分为3组，分别注射CamK-Asi#1、CamK-Asi#2、si-CTL）
给药方式：瘤内注射
给药剂量：5nmol/kg（CamK-AsiRNA及对照siRNA溶于稀释水中）
给药频率：每3天注射一次，持续7周
Fig3.抑制CamK-A对人PDX模型的治疗效果
参考文献：SangL,JuH,LiuG,etal.LncRNACamK-AregulatesCa2+-signaling-mediatedtumormicroenvironmentremodeling[J].Molecularcell,,72(1):71-83.e7.
应用案例4：
JournalofNeuroinflammation(IF5.)丨InhibitionofMLKL-dependentnecroptosisviadownregulatinginterleukin-1R1contributestoneuroprotectionofhypoxicpreconditioningintransientglobalcerebralischemicrats
研究模型：短暂性全脑缺血（采用四血管阻断法诱导大鼠短暂性全脑缺血（tGCI），具体步骤详见文章材料与方法）
动物模型：短暂性全脑缺血大鼠模型（根据处理的不同将大鼠分为3组：tGCI组、HPC组（低氧预适应组）和Sham组（假手术组，除颈总动脉闭塞外，其余手术过程相同），每组又分为MLKL-siRNA组和对照组）
给药方式：海马CA1区双侧注射
给药剂量：10μlMLKLsiRNA(2μmol/L)
给药频率：对于Sham组，在手术后24h注射1次；对于tGCI组和HPC组，在缺血前24h注射1次
Fig4.海马内注射MLKL-siRNA可减轻tGCI诱导的CA1神经元损伤
参考文献：ZhanL,LuX,XuW,etal.InhibitionofMLKL-dependentnecroptosisviadownregulatinginterleukin-1R1contributestoneuroprotectionofhypoxicpreconditioningintransientglobalcerebralischemicrats[J].Journalofneuroinflammation,,18(1):1-15.
应用案例5：
PLoSgenetics(IF5.)丨Physiologicalandgeneticconvergencesupportshypoxiaresistanceinhigh-altitudesongbirds
研究模型：缺氧耐受性（高海拔鸣禽（鸟类）被捕获后，在实验室适应约14天，然后将15只体重相近的个体随机分为3组进行缺氧试验。缺氧试验中，使用缺氧室控制常压状态下(20.9kPa)的氧浓度，随后将氧浓度由常氧(20.9%)逐渐降低到低氧(9%)，以构建缺氧耐受性环境）
动物模型：高海拔鸣禽模型（根据处理的不同将鸟类分为3组，每组5只：EPAS1siRNA组、MEF2C+EPAS1siRNAs组和对照组）
给药方式：胸大肌2毫米深垂直注射（注射部位靠近鸟脊约0.5cm）
给药剂量：1nmol
给药频率：每3天注射1次，持续15天
Fig5.胸大肌注射EPAS1siRNA或MEF2C+EPAS1siRNAs导致鸟类肌纤维明显增大、肌原纤维直径较小、线粒体发生严重的自噬
参考文献：XiongY,FanL,HaoY,etal.Physiologicalandgeneticconvergencesupportshypoxiaresistanceinhigh-altitudesongbirds[J].PLoSgenetics,,16(12):e.
应用案例6：
Theranostics（IF8.）丨IdentificationofanovelmicroRNA--3p/ForkheadboxC1/β-cateninaxisassociatedwithrheumatoidarthritissynovialfibroblastfunctioninvivoandinvitro
研究模型：关节炎（在第0天和第7天，通过在尾巴底部（0.1mL）和背部两个部位（每个部位0.2mL）注射在弗氏不完全佐剂中乳化的牛II型胶原蛋白来建立胶原蛋白诱发的关节炎（CIA））
动物模型：CIA大鼠模型（总共分6组，第一组：无治疗，正常对照；第二组：CIA模型对照，无其他治疗；第三组：注射动物用siFoxC1；第四组：注射siControl；第五组：注射miR--3pagomir；第六组：注射agomirNC）
给药方式：踝关节内注射
给药剂量：5nmol（siRNA溶于0.9%生理盐水中，30μL体积）
给药频率：每周一次，持续3周
Fig6.踝关节内注射miR--3pagomir/FoxC1特异性siRNA阻碍了大鼠胶原诱导性关节炎（CIA）的发展
参考文献：WangJ,WangY,ZhangH,etal.IdentificationofanovelmicroRNA--3p/ForkheadboxC1/β-cateninaxisassociatedwithrheumatoidarthritissynovialfibroblastfunctioninvivoandinvitro[J].Theranostics,,10(12):.
应用案例7：
CancerCellInternational(IF4.)丨VesicletransporterGOLT1BmediatesthecellmembranelocalizationofDVL2andPD-L2andpromotescolorectalcancermetastasis
研究模型：结直肠癌（将新鲜切除的结直肠癌肿瘤组织接种于血供丰富的BALB/c裸鼠右前腋窝，构建PDX模型）
动物模型：PDX模型（接种2周后，将小鼠分为2组：处理组（siGOLT1B）和对照组（si-control），观察并记录体重和肿瘤大小）
给药方式：腹腔注射
给药剂量：1nmol
给药频率：每2天注射1次，持续4周
Fig7.腹腔注射siGOLT1B可抑制PDX模型肿瘤进展
参考文献：LiuT,LiuB,LiuY,etal.VesicletransporterGOLT1BmediatesthecellmembranelocalizationofDVL2andPD-L2andpromotescolorectalcancermetastasis[J].CancerCellInternational,,21(1):1-15.
更多动物用siRNA应用案例持续更新中，敬请期待……
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